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「DIFF+」HPV假病毒中和检测服务｜助力疫苗研发精准高效

9月11日，国新办举行“高质量完成‘十四五’规划”系列主题新闻发布会。会上，国家卫生健康委副主任、国家疾控局局长沈洪兵宣布：今年国家将推出面向适龄女生的HPV（人乳头瘤病毒）疫苗接种服务，并将HPV疫苗纳入国家免疫规划。

图片来源：央视新闻

HPV病毒结构与基因组序列

人乳头瘤病毒（Human Papillomavirus, HPV）属乳头瘤病毒科，为无包膜的双链环状DNA病毒，直径约55nm。其衣壳由主要衣壳蛋白L1（72个五聚体构成二十面体对称结构）和次要衣壳蛋白L2组成。病毒基因组长约8kb，包含早期区（E1-E7）、晚期区（L1-L2）及长调控区（Long Control Region, LCR）。其中E6/E7基因为关键致癌基因，通过干扰p53和视网膜母细胞瘤蛋白（Rb）通路驱动细胞恶性转化。

图1.HPV基因组E区（早期区）—橙色，L区（晚期区）—绿色基因，LCR（长调控区）—蓝色，P97、P670、PE8—启动子，pAE—早期多聚腺苷酸化位点，pALs—晚期多聚腺苷酸化位点

HPV致癌机制

近年来，研究表明HPV与宫颈癌发病密切相关，目前已分离出200多种HPV病毒，并且根据其致病力及致癌作用将其分为高危型HPV和低危型HPV，其中部分HPV可以通过性接触传播。HPV病毒具有嗜上皮特性，其感染宿主后可在表皮、生殖器、口腔黏膜等部位的上皮基底细胞中大量复制，当机体免疫力降低后可随机整合到宿主基因组中，随后沉默E2基因，从而减少其对E6、E7基因的抑制，使E6、E7蛋白过表达，辅以E5蛋白的表达，从而诱导感染细胞无限增殖甚至癌变。

研究表明高危型HPV的持续感染与高级别子宫颈病变及宫颈癌的发生密切相关。90%的宫颈癌与高危型HPV持续感染密切相关，其中HPV16、18型的相关度最高。宫颈癌在全球女性恶性肿瘤发病率中排名第4，在15~44岁女性恶性肿瘤发病率中高达第二，是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤，每年全球约有53万例的初诊宫颈癌病例，其中约有13万例是中国女性。

图2.HPV感染宫颈癌过程

图片来源：知乎@NUT

HPV疫苗研发进展情况

目前国内已有多款HPV疫苗上市，进口疫苗包括GSK的二价疫苗、默沙东的四价和九价疫苗，国产疫苗包括厦门万泰的二价和九价疫苗、沃森生物的二价疫苗。国内多家企业也正在积极推进HPV疫苗的研发，尤其是九价、十一价、十四价等高价疫苗的临床试验。部分疫苗已进入III期临床试验阶段，预计未来几年内将有更多产品上市。

表1.国产HPV疫苗普遍预计将于2025年后陆续上市

数据来源：西南证券

迪福润丝生物HPV假病毒中和抗体检测服务

针对HPV中和抗体检测，迪福润丝生物采用世界卫生组织（WHO）在《HPV VLP疫苗质量、安全性及效力评价指导原则》中推荐的金标准方法——PBNA法（假病毒中和试验）。中和抗体是可以特异性识别病毒表面的抗原中和位点，阻止病毒入侵细胞繁殖，保护机体免受其害，具有真正的抗病毒作用，是评价免疫效果的指标。

由DIFF-HPV假病毒中和抗体检测结果（图3）可计算得到，该HPV抗血清样品针对HPV33型别的ID50为1800，针对HPV18型别的ID50为4266。当稀释度为1/160时，两种型别DIFF-HPV假病毒可以被抗血清完全中和。

产品目录

迪福润丝生物独家开发的DIFF-HPV假病毒涵盖GFP/RFP/BFP/Luciferase等多种报告基因，具有信噪比高、稳定性强（反复冻融5次对假病毒无影响）、只需培养于普通的293T细胞中等优势，包含九价的HPV16型、18型、6型、11型、31型、33型、45型、52型等主要型别。假病毒本身具有单轮感染的特性，对实验室生物安全等级要求低，非常适合用于HPV中和试验PBNA法（pseudovirus based neutralization assay，PBNA）。